在众多同类题材的绘画作品里，达芬奇的作品《最后的晚餐》被公认为空前之作，尤其以构思巧妙，布局卓越，细部写实和严格的体面关系而引人入胜。构图时，达芬奇将画面展现于饭厅一端的整块墙面，厅堂的透视构图与饭厅建筑结构相联结，使观者有身临其境之感。画面中的人物，其惊恐，愤怒，怀疑，剖白等神态，以及手势，眼神和行为，都刻画得精细入微、惟妙惟肖。这些典型性格的描绘与画题主旨密切配合，与构图的多样统一效果互为补充。

在这幅画中，13个人在一个平面内展开，一起出现在人们的眼前，耶稣作为整场晚宴的绝对中心，自然坐在了中间的位置。他的细节刻画十分用心，耶稣的两只手都放在桌子上，头没有摆正，而是向着另一个方向倾斜，很明显，作者想要通过耶稣的状态来表达一些什么情感，而作者的目的，就是渲染一种十分凄凉的氛围。因为这顿晚餐之后，耶稣就被犹大出卖，走到了生命的尽头。

达·芬奇的《最后的晚餐》不仅标志着达·芬奇艺术成就的最高峰，也标志着文艺复兴艺术创造的成熟与伟大。这件作品达到了素描表现的正确性和对事物观察的精确性，使人能真切感受到面对现实世界的一角，在构图处理上也取得了巨大成就，人物形象的组合构成了美丽的图案，画面有着一种轻松自然的平衡与和谐。更为重要的是，他创造性地使圣餐题材的创作向历史源流的文化本义回归，从而赋予了作品以创造的活力和历史的意义。

达芬奇在最后的版本中，采用了平行透视法，运用了最为传统的一字形排开的构图惯例，让中心焦点集中于耶稣，达芬奇为了追求作品的精确性，甚至在图画区域的中心打上一个小孔，作为整幅壁画的没影点，这个点就在耶稣的右太阳穴上。耶稣伸开双手，低垂双眼。他已经把话说完，沉默着。但是他的手势却有着不可抗拒的号召力，召示和启迪人们去内省，去沉思。

达·芬奇被认为是明暗对比法之父，尤其是他的《最后的晚餐》，在较后的艺术中第一次大规模地把明暗用作构图因素。”所有人物都被统摄于神秘而宁静的光影之中。不同于卡斯塔尼奥等三位画家，列奥纳多用阴影消除了背景中应该会有的所有的细节。

最后的晚餐是一个重大事件，宣告了上帝对世界计划的转折点。因为最后的晚餐，主被犹大出卖，被钉在十字架上，所以上帝的救赎计划得以实现。最后的晚餐使人们回想耶稣的完美牺牲，纪念耶稣十字架上伟大救赎之恩。